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伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟

更新時(shí)間:2017-10-11  |  點(diǎn)擊率:2624
  伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽可快速、高質(zhì)量地轉(zhuǎn)印小型凝膠。作為Mini-PROTEAN 3 電泳系統(tǒng)的一個(gè)組件,伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽能容納2 個(gè)凝膠支架轉(zhuǎn)印夾,用于在Mini-PROTEAN 3 電泳槽內(nèi)電轉(zhuǎn)印兩種小凝膠(Mini-PROTEAN 3 凝膠和ReadyGel 預(yù)制膠)。
  伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽特點(diǎn)包括:
  1.1小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)印2 塊7.5 x 10 cm 凝膠;也可進(jìn)行低強(qiáng) 度的過(guò)夜轉(zhuǎn)印
  2.電極絲相距4cm,以產(chǎn)生強(qiáng)電場(chǎng)保證有效的蛋白轉(zhuǎn)印
  3.顏色標(biāo)記的轉(zhuǎn)印夾和電極,確保轉(zhuǎn)印過(guò)程中凝膠 的正確定向
  4.內(nèi)置bio-rad冷卻裝置,快速吸收轉(zhuǎn)移過(guò)程中產(chǎn)生 的熱量
  5.既可作為完整的獨(dú)立設(shè)備,又可作為一個(gè)模塊與 Mini-PROTEAN 3 轉(zhuǎn)印槽的緩沖液槽和蓋兼容
  伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟:
  全程請(qǐng)戴手套操作,以免污染伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽!
  1)電泳后SDS-PAGE 膠片浸在轉(zhuǎn)印緩沖液中,洗2~3 次,每次10min.
  2)取出伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽,先小心放一攪拌子在底部,再倒一半轉(zhuǎn)印緩沖液。
  3)取轉(zhuǎn)印紙切成約如膠片大小,先在方形培養(yǎng)皿中以少許甲醇浸濕數(shù)秒鐘,再置入伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽中的緩沖液10 min 后使用。 另取兩張濾紙,以及兩片方形海綿墊,都放在伯樂(lè)轉(zhuǎn)印槽的緩沖液中備用。
  4)取出轉(zhuǎn)印夾打開(kāi)平放,先墊一張方形海棉墊,鋪上一張濕濾紙,小心平鋪SDS-PAGE膠上去,然后小心迭上已潤(rùn)濕的轉(zhuǎn)印紙,用涂菌玻璃棒趕出氣泡;轉(zhuǎn)印紙?jiān)俚紊蠑?shù)滴緩沖液后,加蓋一層濾紙,及另一張海綿,也都不可陷入氣泡,即可把整個(gè)轉(zhuǎn)印三明治卡夾裝好。
  膠迭到轉(zhuǎn)印紙時(shí),一次成功,不要重作,否則蛋白質(zhì)色帶可能會(huì)印上去,zui后產(chǎn)生重迭影像。
  5)將轉(zhuǎn)印三明治置入已經(jīng)放有一半轉(zhuǎn)印緩沖液的伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽中,注意有轉(zhuǎn)印紙的那一面向正極(紅色),膠片那面向負(fù)極(黑色)。
  6)當(dāng)三明治都放入伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽后,以轉(zhuǎn)印緩沖液蓋滿(mǎn)所有的三明治,小心動(dòng)一動(dòng)卡夾,除去附在卡夾內(nèi)外的氣泡,蓋上蓋子,放到一攪拌器上,打開(kāi)攪拌器開(kāi)始攪拌,同時(shí)接好電源,裝置完成后放置10 min.
  7)以300mA開(kāi)始轉(zhuǎn)印,溫度會(huì)漸漸上升,轉(zhuǎn)印1.5 h左右 后中止轉(zhuǎn)印,取出轉(zhuǎn)印三明治,打開(kāi)后依次取出轉(zhuǎn)印紙及膠。
  具體轉(zhuǎn)印條件要根據(jù)蛋白的大小進(jìn)行優(yōu)化,注意低溫。
  8)轉(zhuǎn)印后的膠片可以繼續(xù)進(jìn)行染色,看有無(wú)蛋白質(zhì)殘留。若電泳時(shí)加有藍(lán)色標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)marker(SeeBlue),則可在轉(zhuǎn)印紙上看到藍(lán)色的色帶,確定轉(zhuǎn)印成功,并可評(píng)估轉(zhuǎn)印效率。
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